如何进行叶绿素含量测定 用丙酮法

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操作方法：

1.【实验原理】在叶绿素a和b的吸收光谱曲线中，在红色波长范围内，叶绿素a的最大吸收峰在663nm处，叶绿素b的最大吸收峰为在645nm。吸收曲线再次重叠，叶绿素a和b的吸收峰在D652nm处相交，均具有相同的比吸收系数（均为34.5），也可在此波长（D652）下测定一次，得到叶绿素a和b 总量：CT=(D6521000)/34.5 根据Lambert-Beer定律，具有不同最大吸收峰的两种组分的混合物其浓度C与光密度OD的关系如下： OD1=Ca ka1 +Cb kb1 (1)OD2=Caka2+Cbkb2 (2) Ca为a组分的浓度（g/L） Cb为b组分的浓度（g/L） OD1为波长1处的浓度（即组分a)的最大吸收峰波长，混合物的光密度OD值。 OD2为混合物在波长2（即组分b的最大吸收狭缝波长）下的光密度OD值。 ka1、kb1、ka2、kb2分别为组分a、b的比吸收系数，即组分a(b)的浓度为(1g/L)时，其在相应波长(1、2)下的光密度OD ） 价值。叶绿素A、B的80%丙酮溶液，浓度为1时，比吸收系数K值如下： 波长/nm 叶绿素a 叶绿素b66382.049.2764516.7545.60 将表中数值代入上式(1), (2) and Arranged: Ca=0.01272OD663-0.00259OD645Cb=0.02288OD645-0.00467OD663 如果将Ca和Cb的浓度单位由原来的g/L改为mg/L，则上式可以改写为如下形式： Ca=12.72OD663- 2.59OD645 (3) Cb=22.88OD645-4.67OD663 (4) Ct=Ca+Cb=8.05OD663+20.29OD645 (5) Ct为叶绿素总浓度，单位为克/升。叶绿素A、B和总叶绿素的浓度（g/L）可用式（3）、（4）、（5）计算。

2.【设备与试剂】实验仪器：高级分光光度计、离心机、天平、剪刀、研钵、漏斗、移液管实验试剂：丙酮、碳酸钙实验材料：植物叶片

3.【实验步骤】 1、取鲜叶，剪去粗脉切块，称0.1g放入研钵中，加入少量80%丙酮，碳酸钙和石英砂少许，研磨成匀浆，加入80%丙酮，将匀浆转移至离心管中，用适量80%丙酮洗涤研钵，转移至离心管中，用稀释至10ml 80% 丙酮。离心。 （室温避光浸取） 2、取浸膏，用722型可见光分光光度计分别在663nm、645nm、652nm波长处测定吸光度，以80%丙酮作参比。根据公式计算叶绿素a和叶绿素b，计算出总叶绿素含量（a+b）。

4.【实验结果】叶绿素a含量（mg/g）=（12.72A663-2.59A645）*Vs/1000w 叶绿素b含量（mg/g）=（22.88A645-4.67A663）* Vs/1000wVs：提取物总体积（ml）

以上就是有关如何进行叶绿素含量测定，用丙酮法的介绍，希望能够帮助到大家！